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Análise de imagens de Micro gráficos

Você pode desejar realizar determinações quantitativas em suas imagens, incluindo medidas de áreas e distancias. Há softwares disponíveis especificamente ajustados para análises de micro gráficos; no entanto, tais programas geralmente são muito caros. Determinações similares podem ser feitas com o programa Adobe Photoshop ou Image J (disponível em  http://rsb.info.nih.gov/ij/ ). Nosso laboratório desenvolveu um programa de análise de imagem, RootScann, o qual é gratuito e disponível para download. 

Para a maior parte, cálculo de área (ou a área percentual ocupada por uma dada estrutura dentro da seção inteira) é realizada usando contagem de pixels. Para esses cálculos, seleciona-se uma área desejada, e o programa fornece informações sobre o número de pixels naquela área. É necessário manter registro da contagem de pixels dada pelo programa, e o meio mais fácil para se fazer isso é ir transferindo a contagem de pixels para uma planilha de Excel de acordo que você trabalha. A planilha deveria ser previamente marcada com suas categorias e tratamentos desejados antes de iniciar. Note que algumas determinações só podem ser obtidas indiretamente, por meio de subtração ou adição de outras medições.

Usando Fotoshop

CALCULANDO ÁREAS

  1. Abra a imagem que você deseja trabalhar no Fotoshop
  2. Abra uma planilha do Excel, preferível previamente marcada com seus tratamentos, e categoria de pixels.
  3. Certifique-se de que seu menu do histograma (canto superior direito do Fotoshop) esteja aberto.
  4. Assegurando-se de que a ferramenta “Magic Wand” esteja habilitada no menu de ferramentas (lado esquerdo), destaque os campos desejados, usando a tecla shift e o mouse junto para destacar várias áreas que não estão tocando na imagem.

 

Se você encontrar problemas, aqui estão alguns truques que você pode tentar:

  • Use Select-> Collor Range. Você pode selecionar áreas coloridas de inúmeras maneiras com essa ferramenta. Primeiro, você pode selecionar highlights, lowlights, etc. Ou você pode escolher uma cor desejada em sua imagem com a ferramenta eyedropper (a cor que você escolher aparecerá na paleta de ferramentas, próximo da base como um quadrado de cores). Use a barra de deslizar “Fuzziness” para ajustar a escala de sombreamento escolhida (aumente a imprecisão – fuzzines - se, por exemplo, mais tons de azul são desejadas)
  • Faça a imagem preto e branco: Image->Mode->Greyscale, então use Select->Color Range, de acordo com a descrição acima.
  • Como último recurso... você pode usar a ferramenta “Lasso” para realmente destacar uma dada forma usando o mouse.

 5. Se você foi bem-sucedido em selecionar seu campo desejado, e gostaria de selecionar o oposto, use Select->Inverse. Para saber o total de pixels na sua imagem, use Select->All

6. Registre o número de pixels a partir do histograma na sua planilha de Excel

 

Nota: Você pode corrigir todos os erros, na ordem inversa na qual eles foram cometidos, por meio do click no botão esquerdo em “delete” para uma dada ação no histórico do menu.

CALCULANDO DISTÂNCIA 

Para calcular distancia, você deve ter a imagem de um micrômetro (um slide que tenha uma escala). Esta imagem deve ser da mesma ampliação da imagem na qual você deseja realizar a determinação. Determine uma dada distancia na figura do micrômetro e na sua imagem desejada usando a ferramenta “mesure”, e transfira essa informação para a planilha. Você deverá fazer alguns cálculos simples na planilha para descobrir a distância na sua imagem, baseado no micrômetro, e trocar as unidades.

IMAGEM J

Cálculos semelhantes podem ser realizados em Image J. Por exemplo, em Image J há várias ferramentas de seleção, uma ferramenta eyedroppeer para seleção de cores, e ferramentas de linhas e ângulos para determinações. O menu “Analyze” permite que você veja as determinações das suas áreas ou linhas selecionadas. Essa informação pode então ser transferida para a planilha, como descrito acima para Fotoshop.