Visualizando raízes com microscópio composto
Seccionando Raízes não Embebidas
- Coloque o sistema radicular em um prato com água, e use fórceps para separar as raízes uma das outras. Assim que o segmento para seccionamento foi selecionado, use uma lâmina amolada para remover essa porção.
- Sob um microscópio de dissecação, coloque o segmento de raiz em uma gota de água sobre um pedaço de cera dental colocada sobre um pequeno painel de vidro. A gota de água deve ser grande suficiente para submergir completamente o segmento. Mova o painel de vidro até que você consiga ver sua amostra através da ocular do microscópio. Ajuste o estágio e fonte de luz externa até que o contraste desejado seja conseguido. O segmento de raiz deve ser orientado na direção que seja mais confortável para você, mas certifique que você seja capaz de olhar diretamente na superfície cortada. Isso permitirá controle máximo de seccionamento. Use a margem da plataforma para firmar suas mãos e/ou a margem da bancada do laboratório para firmar seus antebraços.
- Divida ao meio uma lâmina de barbear de duplo corte com ela ainda na embalagem. Enquanto seccionando, certifique-se de que a lâmina, seus dedos e a secção permaneçam úmidos. A ideia é que a seção deslize dentro e fora da lâmina diretamente na água, e seja amortecido pela água no percurso.
- Mantendo a raiz suavemente para baixo, use sua mão dominante para segurar a lâmina. Faça cortes transversais da raiz, com um simples movimento para baixo. Evite movimentos de vai e vem como em uma serra. É extremamente importante que a lâmina seja mantida perpendicular ao eixo longitudinal da raiz a fim de garantir seções de mesma espessura. Para cortar seções bem finas, você pode desejar descansar a parte plana da lâmina contra o dedo indicador da mão segurando a raiz.
- Quando começar a sentir alguma resistência ao cortar, você pode virar a lâmina e cortar com o lado oposto. Seccionadores experientes aprenderão maximizar a vida útil das lâminas ao usar o seu centro (meio da lâmina) para cortar. Uma vez que a qualidade de suas seções depende fortemente da qualidade do fio de corte da lâmina, troque laminas frequentemente.
- Uma vez cortadas muitas seções, você deverá mudá-las para uma lâmina ou prato de coloração (corante). Correntes de convecção (movimento da água) são criadas no reservatório de água durante o seccionamento; então, deve-se prestar a atenção para que as seções de boa qualidade não flutuem de volta e sejam cortadas ao meio pela lâmina em movimento.
- Transferir as seções para uma prancheta ou vidro de relógio (se corando) ou diretamente em uma gota de água em uma lâmina. Várias ferramentas podem ser usadas para transferir as seções, incluindo palitos alaranjados com pontas, pinceis de artesanatos, ou acessórios de pelo. Em todo caso, é melhor um par de palitos. Se usar pinceis de artesanato, você pode desejar remover alguns pelos. Ferramentas de pelo são feitas pela colagem de cílios humanos ou pelo de dálmatas no extremo de um espeto ou extremo de madeira de um cotonete de algodão. Para transferir as seções, use um palito ou escove para juntar aos outros. Para removê-los do palito ou pincel, encoste gentilmente em uma gota ou um pouco de água.
- Coloque tantas seções quanto possível em uma lâmina, e gentilmente coloque a lamínula sobre a gota de água. Para evitar bolhas de ar, coloque um extremo da lamínula na gota de água e libere gentilmente sobre o restante da gota. Se sua gota de água não estender até o extremo da lâmina, use uma pipeta Pasteur para adicionar vagarosamente um pouquinho mais de água. Não use muita água sob a lamínula, ou as seções ficarão flutuando (e possivelmente para fora) da lâmina.
- Observe as seções em um microscópio ótico composto
Seccionando Raízes Incorporadas (INCLUSãO)
- Dependendo da qualidade do tecido, do seu nível de expertise, e de outros fatores, você pode escolher incorporar/embutir o tecido fresco ou preservado usando outros tecidos vegetais como tecido suporte para fazer seções manuais. Você pode, também, incorporar o tecido em outros meios, tais quais: agarose, resina (plástica), ou cera de parafina.
- O tecido que você deseja seccionar deve ser colocado em algum tipo de tecido suporte (i.e., medula de sabugueiro, cenoura, batata, etc.) que tenha sido preservado em etanol 75% por vários meses. Tecido suporte deveria ser embebido por uma hora, ou mais, antes de inserir seu tecido. Corte um pequeno sulco em um pedaço do tecido suporte (ou em duas metades), coloque seu tecido dentro, e seccione de acordo com a instrução acima.
